Svår och hydrofob peptidsyntes

Svår peptidsyntes|Hydrofob peptidanpassning|Svår peptidsyntes|Klustersekvenssyntes|Vetenskap-Peptid

Peptidsekvens för hydrofob? Aggregera lätt? Flera par av disulfidbindningar? Science-Peptides tjänster för svår peptidsyntes och hydrofobisk peptidsyntes är specialiserade på alla typer av "kan inte få det gjort". 20 års erfarenhet, speciella lösningsmedelssystem, stabil leverans. Kontakta oss gärna.

Vilken typ av peptider anses vara "svåra"?
Efter att ha varit i peptidsyntesbranschen i 20 år har jag sett alla typer av svåra peptider. När kunder kommer till oss har de redan frågat flera företag, och svaret de får är antingen "Jag kan inte göra det" eller "Prova det, ingen garanti".

Peptid med stark hydrofobicitet: transmembranregion, signalpeptid, hydrofob aminosyra, när den syntetiseras kommer den att klumpas ihop på hartset, och aminosyran bakom den kommer inte att kunna komma in.
Peptider som lätt aggregeras, såsom amyloid- och antimikrobiella peptider, staplas upp när de syntetiseras och täpper till kolonnen när de renas.
Peptider med flera par av disulfidbindningar: fler än tre par, ett fel steg i parningsordningen och hela molekylen är förstörd.
Lång peptid: mer än 60 aminosyror, varje steg i utbytet minskar, och till slut finns ingenting kvar.
Komplex kombination av modifikationer: fosforylering, fluorescens, cyklisering och förhållanden som bekämpar varandra.
Vi kan ta dem alla, och det är inte "försök", det är "ha en plan".

1. Hydrofoba peptider: med specialiserade lösningsmedelssystem
Svårigheten med hydrofoba peptider ligger i det faktum att de inte kan lösas i konventionella lösningsmedel, och när de syntetiseras "klumpar peptidkedjan ihop" på hartset, vilket gör det omöjligt för aminosyrorna bakom det att komma in.

Vår lösning:
Speciell lösningsmedelskombination: DMF, NMP, DCM blandat system, plus lite flytande släppmedel, så att peptidkedjan har hållits sträckt.
Temperaturoptimering: vissa reaktioner är bättre vid 40 grader än rumstemperatur, vissa måste sänkas till 0 grader, vi har provat dem en efter en.
Hartsval: Använd höglöslighetsharts för hydrofoba peptider för att lämna tillräckligt med utrymme för peptidkedjor.
Solubiliserade etiketter: Om du inte kan, lägg till en hydrofil etikett och skär av den efter syntes.

Verkliga fall: en 35aa transmembran peptid, hydrofoba aminosyror stod för 70%, letade kunden efter tre företag kan inte göras. Vi ändrade lösningsmedelssystemet och lade till solubiliserande etikett, slutligen var renheten 92%, och kunden gjorde strukturstudien smidigt.

2. Flera par av disulfidbindningar: ingen tur, strategi
Ju fler disulfidbindningar det finns, desto svårare är det att para ihop dem. Två par är bra, men tre eller fler par, och ett fel steg och allt är över.
Vår strategi:
Ortogonalt skydd: Cys kan öppnas och paras i steg med olika skyddsgrupper, såsom Trt, Acm, tBu.
Optimering av oxidationsförhållanden: luftoxidation, glutationoxidation, jodoxidation, olika metoder för olika peptider.
Intermediär QC: Efter varje par, ta ett prov för MS och bekräfta parningen innan du går vidare.
MS/MS-bekräftelse (valfritt): slutlig uppdelning-med sekundär masspektrometri för att se var disulfidbindningarna faktiskt är fästa.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90 % renhet, korrekt parade disulfidbindningar och kristallstrukturen löstes sedan av kunden.

3. Aggregation-benägna peptider: syntetiseras samtidigt som de försvaras
Vissa peptider älskar naturligt att aggregera, såsom amyloidprotein och antibakteriell peptid. De börjar aggregera när de syntetiseras, blockerar kolonnen när de renas och kan inte lösas upp när de är i handen.
Vår lösning:
Pseudoprolin: Pseudoprolin introduceras vid Ser/Thr-position för att störa aggregationstendensen och ändra tillbaka efter syntes.
Segmentsyntes: Peptider som är alltför polymeriserade skärs i flera segment och syntetiseras separat och kopplas sedan samman i slutet.
Optimering av reningsförhållanden: hög temperatur, surt pH, tillsats av organiska lösningsmedel för att hitta förhållanden som gör det icke-polymeriserande.

4. Komplexa modifieringskombinationer: förhållanden utan slagsmål
Vissa peptider har flera krav: fosforylering, fluorescerande märkning och cyklisering. Dessa modifieringar kan komma i konflikt med varandra - till exempel är fosforylering syra-fobisk, fluorescerande märkning är lätt-fobisk och cyklisering kräver ett specifikt pH.
Vårt tillvägagångssätt:
Konserveringsstrategidesign: vilken trim som ska göras först, vilken trim som ska göras senare, designad i förväg.
Ortogonala förhållanden: Betingelserna för varje steg i reaktionen påverkar inte de modifieringar som redan gjorts.
Intermediär QC: Efter varje modifieringssteg, ta ett prov för att se till att det görs korrekt innan du går vidare.

5. Renhet: Beroende på vad du gör med den

Varje peptid åtföljs av en HPLC- och MS-rapport, vilket gör renhetsdata transparenta.

1. Vi har gjort det här i 20 år
Svår peptidsyntes är inget som vem som helst kan göra. Genom åren har vi hanterat en hel del svåra peptider: transmembranproteiner, virala fusionspeptider, konotoxiner, amyloidproteiner, antimikrobiella peptider etc. Vi har en god uppfattning om vilka sekvenser som är benägna att få problem, och vilka förhållanden som kan rädda dem. Du behöver åtminstone inte prova varenda en av dem om du kommer till oss för svår och hydrofobisk peptidsyntes.

2. Det är inte "försöka", det är "ha ett program".
Många företag tar på sig svåra peptider och säger, "Vi ska prova det, men vi garanterar det inte". Vi spelar inte så. Innan vi accepterar en order kommer vi att utvärdera sekvensen, vad är andelen hydrofoba aminosyror, om det finns någon känd aggregationstendens, hur många par av disulfidbindningar och om modifieringen är komplex eller inte. Efter utvärdering kommer vi att berätta: vad är framgångsfrekvensen och hur lång är cykeltiden.

Vi tar inte emot order som inte kan göras, och vi måste lämna över order som vi har tagit.

3. Specialiserade lösningsmedelssystem för hydrofobicitet
Hydrofob peptid är vår starka sida. Om det konventionella lösningsmedlet inte kan lösas kommer vi att byta lösningsmedlet; om den konventionella temperaturen inte reagerar kommer vi att justera temperaturen; om det konventionella hartset inte håller ut kommer vi att byta harts. Det finns också den solubiliserande etiketten som en bakväg ut.

4. Flera par av disulfidbindningar, steg-för-steg
Om det finns fler än tre par disulfidbindningar kommer vi att ta ett steg-för-steg: det första steget är att skydda A och öppna det första paret; skydda B och öppna det andra paret; skydda C och öppna det tredje paret. Efter varje steg tar vi prover för MS och bekräftar ihopparningen innan vi går vidare. Slutligen kommer MS/MS att brytas och verifieras, och data kommer att ges till dig utan att du gissar.

5. Kvalitetskontroll: data vid varje steg
Kvalitetskontroll av svåra peptider måste vara mer försiktig:
Intermediär QC: Efter varje fragment och varje modifieringssteg, mät först renheten och molekylvikten.
Slutprodukt: HPLC för renhet, MS för molekylvikt.
Löslighetstest: Ge rekommenderade lösningsmedel och solubiliseringsmetoder, så att du inte får peptider som inte löser sig.
Genom att göra svår och hydrofob peptidsyntes talar data för sig själv, varje steg kan spåras.

• Leveransform: lyofiliserat pulver, centrifugrör eller flaskor.
• Medföljande dokument: COA (HPLC-profil + MS-spektrum), syntesrapport (valfritt).
• Valfria tester: peptidhalt, endotoxin, fukt, aminosyrasammansättning, löslighetstest.
• Anpassad förpackning: portionering och märkning enligt dina krav.
• Varje svår och hydrofob peptidsyntesprodukt granskas för att säkerställa att sekvensen är korrekt och att renheten är upp till standard innan den skickas ut.

Oavsett om du har blivit avvisad av andra, eller om du inte kan göra det i ditt eget labb, kan du prata med oss. Om du letar efter Science-peptid för att göra svår och hydrofobisk peptidsyntes, behöver du åtminstone inte prova en efter en.

Jag behöver att du berättar för mig:
Peptidsekvens (eller målinformation)
Har du låtit någon annan göra det tidigare? Vad är resultatet?
Hur mycket (milligram)
renhetskrav

När vill du ha det?

Ge dig en genomförbarhetsbedömning och programoffert inom 24 timmar.